Ngân hàng tế bào và mô - Tài liệu, ebook, giáo trình, hướng dẫn

Nguồn tế bào Tế bào từ máu dây rốn Tế bào từ màng lót dây rốn Tế bào từ mô mỡ Máu ngoại vi

38 trang | Chia sẻ: nguyenlinh90 | Lượt xem: 655 | Lượt tải: 1

Bạn đang xem trước 20 trang tài liệu Ngân hàng tế bào và mô, để xem tài liệu hoàn chỉnh bạn click vào nút DOWNLOAD ở trên

ThS. Vũ Bích Ngọc – vbngoc@hcmus.edu.vn Nơi lưu trữ các dòng tế bào và mô người hoặc động vật Được sử dụng để tạo ra các sản phẩm sinh học/ công nghệ sinh học Tế bào được kiểm soát chặt chẽ về chất lượng và Znh an toàn Đời sống Lão hoá Bệnh tật Thẩm mỹ Nghiên cứu Tạo các chế phẩm sinh học/công nghệ sinh học Tiết kiệm vật tư nuôi cấy Lưu giữ dòng tế bào trong thời gian dài Ngân hàng tế bào tại Việt Nam Ngân hàng tế bào gốc MekoStem Bệnh viện Truyền máu huyết học TP.HCM Trung tâm Tế bào gốc Viện Huyết học-‐ Truyền máu TW 15/02/2009 2002 27/4/2010 Thành viên chính thức của Hiệp hội Ngân hàng máu dây rốn Châu Á-‐Thái Bình Dương Các nguồn tế bào/mô đông lạnh Tế bào : tế bào máu, tinh trùng , phôi , tế bào gốc.. Mô : mạch máu, da, gân, giác mạc Tế bào từ máu dây rốn Tế bào từ màng lót dây rốn Tế bào từ mô mỡ Máu ngoại vi Được tạo thành từ một dòng duy nhất Đại diện cho tế bào dự trữ trong điều kiện đông lạnh trong thời gian dài Bảo tồn các đặc điểm Tránh nhiễm và suy thoái Được sản xuất theo sêu chuẩn quy định (21CFR 610) 21CFR 610 GENERAL BIOLOGICAL PRODUCTS STANDARDS •  Subpart A-‐-‐Release Requirements § 610.1 -‐ Tests prior to release required for each lot. § 610.2 -‐ Requests for samples and protocols; oﬃcial release. •  Subpart B-‐-‐General Provisions § 610.9 -‐ Equivalent methods and processes. § 610.10 -‐ Potency. § 610.11 -‐ General safety. § 610.11a -‐ Inacsvated inﬂuenza vaccine, general safety test. § 610.12 -‐ Sterility. § 610.13 -‐ Purity. § 610.14 -‐ Idensty. § 610.15 -‐ Consstuent materials. § 610.16 -‐ Total solids in serums. § 610.17 -‐ Permissible combinasons. § 610.18 -‐ Cultures. •  Subpart C-‐-‐Standard PreparaVons and Limits of Potency § 610.20 -‐ Standard preparasons. § 610.21 -‐ Limits of potency. 21CFR 610 GENERAL BIOLOGICAL PRODUCTS STANDARDS •  Subpart D-‐-‐Mycoplasma § 610.30 -‐ Test for Mycoplasma. •  Subpart E-‐-‐TesVng Requirements for Communicable Disease Agents § 610.40 -‐ Test requirements. § 610.41 -‐ Donor deferral. § 610.42 -‐ Restricsons on use for further manufacture of medical devices. § 610.44 -‐ Use of reference panels by manufacturers of test kits. § 610.46 -‐ Human immunodeﬁciency virus (HIV) "lookback" requirements. § 610.47 -‐ Hepasss C virus (HCV) "lookback" requirements. § 610.48 -‐ Hepasss C virus (HCV) "lookback" requirements based on review of historical tessng records. •  Subpart F-‐-‐DaVng Period LimitaVons § 610.50 -‐ Date of manufacture. § 610.53 -‐ Dasng periods for licensed biological products. •  Subpart G-‐-‐Labeling Standards § 610.60 -‐ Container label. § 610.61 -‐ Package label. § 610.62 -‐ Proper name; package label; legible type. § 610.63 -‐ Divided manufacturing responsibility to be shown. § 610.64 -‐ Name and address of distributor. § 610.65 -‐ Products for export. § 610.67 -‐ Bar code label requirements. § 610.68 -‐ Excepsons or alternasves to labeling requirements for biological products held by the Strategic Nasonal Stockpile. CBER/FDA: các điểm cần xem xét về đặc Znh tế bào CBER/FDA: Các điểm cần xem xét về sản xuất và kiểm định European Pharmacopeia (EP) US Pharmacopeia (USP) Japanese Pharmacopeia (JP) Kiểm tra dòng tế bào Tính đồng nhất Độ snh khiết Ổn định di truyền Đảm bảo chất lượng tạo thành từ ngân hàng tế bào chủ đến tế bào sản phẩm Máu cuống rốn được trữ trong Nito lỏng (-‐1960C) Máu cuống rốn được thu nhận vào túi chứa máu Túi chứa máu được vận chuyển về khu lưu trữ sản phẩm Máu cuống rốn được chuyển lại túi chứa máu Kiểm tra và phân Zch máu. Tế bào hồng cầu được loại bỏ khỏi máu Cuống rồn nối với em bé được thu nhận cùng nhau thai Kiểm tra dòng tế bào về sự ổn định và nhiễm. Tế bào được nuôi lại để đảm bảo ở pha log của tăng trưởng. Dán nhãn cryotubes với tên dòng tế bào, số lượng tế bào/lọ, ngày, MCB Xác định tỉ lệ tế bào sống chết Chuẩn bị tế bào trước đông lạnh Môi trường đông lạnh Ø Môi trường cơ bản: DMEM, IMDM, RPMI, . Ø Huyết thanh Ø Kháng sinh Ø Chất bảo quản: glycerol, DMSO 4oC ——> 2 giờ -40oC ——> Một vài ngày -80oC ——> Một vài tháng Nhiệt độ thấp có khả năng "làm chậm thời gian" hoặc thậm chí dừng lại thời gian” sinh học. -196oC à một vài thế kỷ Đông lạnh tế bào Thu tế bào đơn Bổ sung từ từ (nhỏ giọt) môi trường đông lạnh chứa DMSO nồng độ 10% vào ống chứa tế bào sao cho mật độ tế bào từ 106 đến 107 tế bào/vial Làm lạnh tế bào từ từ Lưu giữ tế bào ở nhiệt độ -‐80 đến -‐1960C Thu nhận và chọn lọc nguồn Thêm chất bảo quản đông lạnh (CPAs) Đông lạnh mẫu, thường từ -80 hoặc -120oC Chất bảo quản đông lạnh (CPA) --là chất được dùng để bảo quản mô/tế bào khỏi các tổn thương do đông lạnh (tổn thương do tạo đá ). VD: glycerol, DMSO liquid nitrogen (-196oC), và bảo quản trong thời gian dài Các bước cơ bản cho bảo quản đông lạnh mô/tế bào Chuẩn hoá thời gian hạ nhiệt Optimal You hurt me. Nếu quy trình đông lạnh quá chậm Tế bào sẽ mất nhiều nước Thể Zch tế bào trở nên quá nhỏ Tế bào sẽ bị tổn thương nghiêm trọng Why it’s me? Optimal Nếu đông lạnh quá nhanh, tế bào mất rất ít nước nước được giữ trong tế bào trở thành snh thể đá, thể Zch tê sbafo có thể không đổi, thậm chí lớn hơn Tế bào chịu tổn thương nghiêm trọng do sự tạo đá nội bào I am Lucky. Optimal Thời gian đông lạnh phù hợp, tế bào giữ được điều kiện tốt nhất cho sự sống sót Bảo quản đông lạnh Đông lạnh Bổ sung CPA Kiểm soát tốc độ Vận chuyển của nước Kiểm soát 2 tiêu chí Kết quả đông lạnh tốt nhất Cách tiếp cận hiệu quả để tối ưu hoá bảo quản đông lanh 2 tiêu chí: (1) sự tạo tinh thể đá và (2)thay đổi thể tích tế bào JSPS Science Dialogue, 2009 cryonics organization today American Cryonics Society Monthly Status Update June 1, 2009 Total Members: 797 Human Patients in Cryostasis: 93 Human Tissue/DNA Samples in Cryostasis: 157 Pets in Cryostasis: 60 (ペット ) Pet Tissue/DNA Samples in Cryostasis: 31 Các tế bào cần được làm tan nhanh chóng và sau đó pha loãng từ từ vào môi trường tăng trưởng. Chuyển một ống tế bào 1ml vào ống ly tâm 15 ml. Thêm từ từ (nhỏ giọt) 10ml môi trương ấm. DMSO có thể gây độc cho tế bào à nên thay môi trường nhanh. Có thể thay DMSO bằng glycerol Rã đông tế bào Lấy mẫu đông lạnh khỏi bình chứa nito lỏng Làm ấm tế bào đông lạnh trong bể ổn nhiệt Loại bỏ CPA khỏi mẫu đông lạnh Ứng dụng lâm sàng 37oC Water Bath Các bước cần thiết để rã đông mô/tế bào và chuẩn bị cho sử dụng lâm sàng đã từng mắc bệnh hoặc kiểm tra dương Znh các loại virus viêm gan B, C, HIV, HTLV1. bị bất kỳ bệnh ung thư nào, hoặc các bệnh về máu như suy tủy,... bị các rối loạn về máu hoặc rối loạn hệ thống miễn dịch do di truyền hay do lây nhiễm. bị các bệnh lây lan qua đường ¨nh dục trong đó có giang mai. bị bất kỳ biến chứng hay bị mắc bệnh trong thời gian mang thai cũng như sinh nở. Trường hợp không nên lưu trữ