Bài giảng Phân tích lipid

Click to edit Master title style Click to edit Master text styles Second level Third level Fourth level Fifth level 4/17/2012 ‹#› Lipid Lipid (chất béo) là nhóm chất hữu cơ không tan trong nước, chỉ tan trong các dung môi hữu cơ như este, benzen, clorofor Một trong 3 thành phần quan trọng của thực phẩm Cung cấp chất dinh dưỡng (cung cấp các chất béo cần thiết như: linoleic, linolenic, arachidonic) Tăng giá trị cảm quan(tạo hương thơm, màu sắc mùi vị..) Cung cấp năng lượng cho con người Trong cấu trúc nên hệ thống các màng sinh học (phospholipid, colesteron) Lipit đơn giản :glyceride, seride, steride… Lipit phức tạp:phostpholipit,glucolipit, lipoprotein… Phân tích lipid Xác định hàm lượng chất béo bằng phương pháp FOLCH Xác định hàm lượng cholesterol bằng phương pháp HPLC Xác định thành phần acid béo có trong dầu mỡ 10 ml chloroform CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH Thực phẩm Mẫu 0.5g Ống ly tâm 5 ml methanol vortex 5 phút vortex 3 phút Bình gạn Lắng gạn 5 ml Methaonol 10 ml chloroform Bình gạn 7ml KCl 0.88% Lắc nhẹ Chuyển sang bình gạn Phân tích hàm lượng cholesterol Chiết lấy dịch chloroform Cô quay KOH 0,5M trong methenol Đun cách thủy Thêm n-heptane Thêm NaCl Chiết bằng petroleum ether Rửa với nước cất Loại nước bằng Na2 SO4K Hòa tan bằng methanol Sắc kí HPLC Kết quả 1 1. Bình chứa dung môi pha động 2 6 13 3 7 4 5 2. Đầu lọc pha động 3. Bơm cao áp 4.Bộ phận ổn định dòng 5.Bộ phận chỉnh dòng 6. Bộ phận chỉnh áp 7. Tiền cột 10 9 8 8. Bơm mẫu 9.Vị trí nạp mẫu 10. Cột sắc ký 11. 11 12 12.Đetecter 13. Hiện thị kết qủa Xác định hàm lượng chất béo bằng phương pháp FOLCH Mục đích Xác định hàm lượng chất béo có trong sản phẩm rắn và lỏng Máy ly tâm Máy lắc đồng nhất hoặc máy khuấy từ Dụng cụ hóa chất Bột amiang cát, bông thủy tinh clorofooc Cồn tuyệt đối 90o DD KCl 0,37M DD HCl 6N Methanol Hóa chất Cách tiến hành Lấy mẫu Nghiền nhỏ mẫu rồi cân lấy khối lượng mẫu nhất định Cho vào cốc máy li tâm Thêm hỗn hợp HCl3 / CH3OH Thêm tiếp KCl rồi lắc mạnh Thêm vào DD HCl 6N Lắc mạnh Cho vào máy ly tâm Lấy ra Dùng pipet Phần dưới H2O CH3OH CHCl3 Lắc mạnh Phần dưới Cho vào phểu chiết Thêm CHCl3 Thêm nước Thêm CHCl3 Cách tiến hành Thu hồi vào bình cầu Lắp vào bộ cất chân không Cồn Chât béo cân Cách tính kết quả Hàm lượng chất béo theo % được tính theo công thức Trong đó G: Trọng lượng bình cầu chúa chấ béo, (g) G1: Trọng lượng bình không (g) G2: Trọng lượng mẫu phân tích (g) Mục đích Kiểm tra độ tinh khiết của một loại dầu hoăc một loai mỡ Xác định thành phần acid béo có trong dầu mỡ Các phương pháp xác định hàm lượng chất béo Phương pháp sắc ký Phương pháp lý hóa Phương pháp hóa học Cho chúng ta biết Dầu? Mỡ ? Xác định thành phần acid của chất béo Thành phần acid của chất béo Giống Địa điểm nuôi trồng Tuổi Mùa vụ thu hoạch Dựa vào tính chất vật lý Tính hấp phụ ánh sáng Tính tan Nhiệt độ sôi Nhiệt độ đông đặc Độ có cực Tính chất hóa học Nguyên lý Dụng cụ Bếp cách cát Ống thủy tinh có nút Pipet có khắc độ Dụng cụ và hóa chất Hóa chất Dung dịch NAOH Dd NaCl bão hòa Na2SO4 khan Iso octan hay hexan Dung dịch BF3 Bông thủy tinh Cách tiến hành Hình :làm khô este methyl Pipet pasto NA2SO4 Bông thủy tinh 1 2 3 Cân dầu Cho khí nito vào Làm khô bằng dòng khí nito Cho đi qua khí nito Đun trên bếp cách cát (800C) Thêm chất đệm Làm nguội Thêm dd NaCl bh Dd hexan Lắc Lắng Phần dưới phần trên (hexan có chứa este metylic) Na2so4 k bông thủy tinh Pipet pasto Tráng lại bằng hexan Este methyl Este mety hoàn toàn khô Có khả năng tách tất cả các chất có trong hỗn hợp Xác định được cả những chất cí hàm lương rất nhỏ Sau khi đưa mẫu phân tích vào máy ta sẽ có phổ sắc ký. Dựa vào phổ sắc ký, có nhiều cách để tính được % trọng lượng các axit béo có trong mẫu phân tích. Trường hợp tổng quát nhất là có thể tính % trọng lượng từng axits béo biểu thị bằng este metyl như sau: % chất i = (Ai/∑Ai) .100 Trong đó:  Ai tiết diện peak của chất i;  ∑Ai: tổng tiết diện của tất cả các peak Thiết bị phức tạp Đắt tiền Ưu điểm Nhược điểm : Xác định được sự biến đổi hàm lượng và thành phần axit béo có trong dầu mỡ Xác định được chỉ số axit đặc trưng cho sản phẩm dầu mỡ Ứng dụng Trong môi trường acid, peroxide trong chất béo tác dụng với KI tạo ra iot ở nhiệt độ nóng hoặc lạnh Xác đinh chỉ số peoxyt Chỉ số peoxyt Chỉ số peroxyt là số gam Iot được giải phóng ra khi cho dung dịch iodua kali tác dụng với 100g chất béo dưới tác dụng của cấc peroxit có trong chất béo. . Cơ sở của phương pháp Chuẩn độ I2 sinh ra bằng dung dịch chuẩn Na2S2O3g Chỉ số này càng cao thì độ tươi của chất béo càng thấp Phản ánh mức độ ôi của chất béo đem phân tích Cách tiến hành Mẫu chất béo Cho vào bình nón Cho hỗn hợp acetic và chlorofoc Lắc cho tan hoàn toàn dung dịch KI bão hòa Để yên DD trong bóng tối Thêm nước cất vào Chuẩn độ bằng Na2S2O3 0.01N dung dịch hồ tinh bột 1% Tính kết quả Trong đó V1: lượng dung dịch Na2S2O3 0,01N dùng chuẩn độ mẫu chất béo,ml V2: lượng dung dịch Na2S2O3 0,01N dùng chuẩn độ mẫu trắng,ml N: nồng độ đương lượng của dung dịch Na2S2O3 G: trọng lượng mẫu phân tích, g Lưu ý Chênh lệch cho phép giữa hai kết quả phân tích song song không được quá 5% Đối với chất béo có hàm lượng peroxit thấp thì có thể dùng dung dịch Na2S2O3 0.002N đẻ chuẩn độ